Kiểm tra độ vô trùng
Ở đây bạn sẽ tìm thấy câu trả lời cho những câu hỏi sau:
|

Điều này được đề cập rõ ràng trong "Hướng dẫn Sử dụng Thử nghiệm Độ vô trùng"
("Nhà sản xuất không được phép thực hiện các thử nghiệm như vậy
..."). Phương pháp dược điển này là phương pháp trọng tài sẽ được thực
hiện trong trường hợp có tranh chấp ("Mục đích của phép thử độ vô khuẩn, giống
như của tất cả các phép thử trong dược điển, là cung cấp cho nhà phân tích đối
chứng độc lập phương tiện xác minh rằng một nguyên liệu cụ thể đáp ứng các yêu
cầu của Dược điển Châu Âu ") và là tiêu chuẩn cho các thay đổi đối với phương
pháp (nhà sản xuất không bị loại trừ khỏi"
Các sản phẩm thuốc mà dược điển yêu cầu vô trùng | |
---|---|
Nhóm sản phẩm thuốc | Yêu cầu |
|
Phải tuân thủ "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Nhãn khoa
|
Phải tuân thủ "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Dung dịch protein | Phải tuân thủ "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Các sản phẩm thuốc phóng xạ để sử dụng qua đường tiêm |
|
Vắc xin cho người
|
Quy định trong các chuyên khảo cá nhân |
Vắc xin dùng trong thú y
|
Nếu quy định trong chuyên khảo, phải tuân theo "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Kháng huyết thanh cho con người | Phải tuân thủ "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Kháng huyết thanh dùng trong thú y | Phải tuân thủ "kiểm tra độ vô trùng" (> 100 ml, lọc màng nếu có thể) |
Chế phẩm Gel cho thẩm mỹ. bác sĩ thú y. | Phải tuân thủ "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Chỉ khâu cho thú y | Phải tuân thủ "kiểm tra độ vô trùng" đối với " chỉ thẩm mỹ và các chỉ khâu phẫu thuật khác". |
Các sản phẩm thuốc được chỉ định (ví dụ như thuốc mỡ) | Nếu chế phẩm được chỉ định là "vô trùng", nó phải tuân theo "thử nghiệm về độ vô trùng". |
Bản phát hành tham số kiểm tra vô trùng
Mặc dù phần mở đầu của "Chương kiểm tra độ vô trùng" 2.6.1 trong dược điển nói rằng việc kiểm tra độ vô khuẩn phải được thực hiện trên các chất, chế phẩm hoặc sản phẩm được quy định về độ vô khuẩn, nhưng điều này không có nghĩa là việc kiểm tra thực sự phải được thực hiện. - như đã đề cập.
Do tính không chắc chắn về mặt thống kê của "thử nghiệm độ vô trùng", việc
phát hành theo tham số được ưu tiên hơn đối với các sản phẩm được tiệt trùng
trong vật chứa cuối cùng. Dược điển đặc biệt đồng ý với điều này (xem
hình Bảng 2).
Tuyên bố từ dược điển Châu Âu về việc phát hành tham số |
---|
"Trong trường hợp sản phẩm được tiệt trùng ở giai đoạn cuối, các bằng chứng vật lý, dựa trên sinh học và được lập thành tài liệu tự động, cho thấy việc xử lý đúng trong suốt lô trong quá trình tiệt trùng đảm bảo cao hơn so với thử nghiệm độ vô trùng. chuẩn bị sản phẩm vô trùng (5.1.1). "Khi sử dụng phương pháp tiệt trùng đầu cuối đã được xác nhận đầy đủ bằng hơi nước, nhiệt khô hoặc bức xạ ion hóa, thì giải phóng theo tham số, tức là xuất xưởng một lô các mặt hàng đã được khử trùng dựa trên dữ liệu quy trình chứ không phải trên cơ sở gửi mẫu của các mặt hàng đó để vô trùng. có thể được thực hiện thử nghiệm với sự chấp thuận của cơ quan có thẩm quyền. " |
Phát hành tham số theo Báo cáo kỹ thuật PDA số 30 | |
---|---|
Tham số | Yêu cầu |
Hiệu quả khử trùng tối thiểu |
|
Các thông số quy trình quan trọng |
|
Quy trình khử trùng |
|
Xác minh Bioindicator (chỉ thị sinh học) |
|
Presterilisation (khử trùng) Bioburden (lượng vi sinh tồn tại sau khử trùng) |
|
Tính toàn vẹn của thùng chứa / đóng gói |
|
Xác nhận quá trình |
|
Các thông số và hồ sơ quy trình |
|
Các thông số và hồ sơ quy trình (tiếp) |
|
Thủ tục phát hành sản phẩm |
|
Tuy nhiên, không dễ dàng như vậy để chuyển từ thử nghiệm độ vô khuẩn sang giải
phóng tham số; các cơ quan có trách nhiệm phải đồng ý.
Điều này đặc biệt có vấn đề nếu sản phẩm đã được đăng ký ở một số quốc gia và
mọi cơ quan có thẩm quyền ghi nhận xét nghiệm độ vô trùng đối với sản phẩm
thuốc có liên quan phải được thông báo và đưa ra sự đồng ý của họ.
Hiện đã có các giấy tờ liên quan đến điều này ở "phía chính thức". Phụ
lục 17: Việc phát hành tham số cho Hướng dẫn EU-GMP, có liên quan chặt chẽ với
một Chú giải EMEA có liên quan cho Hướng dẫn. Công ước Thanh tra Dược
phẩm (PIC) cũng đã ban hành một hướng dẫn liên quan. Các bài báo này đi
xa hơn bài báo PDA: cũng như việc phát hành theo tham số của các sản phẩm
thuốc vô trùng, nó cũng thường được thảo luận cho các thử nghiệm khác.
Phương pháp kiểm tra độ vô trùng
Nếu phép thử độ vô trùng được chọn cho các sản phẩm được tiệt trùng trong vật chứa cuối cùng, hoặc nếu không thể giải phóng thông số, ví dụ đối với các sản phẩm được đóng gói vô trùng, thì nên thực hiện phép thử độ vô trùng theo các thông số kỹ thuật trong dược điển.
Ở đây cũng có thể thực hiện một quy trình khác (trang 1), nhưng nó có thể dẫn
đến các cuộc thảo luận bất tận trong trường hợp thanh tra. Phần sau đây trình
bày những điểm quan trọng nhất của bài kiểm tra.
Thử nghiệm vô trùng có trong Ph. Eur. 4,6 là kết quả của sự hài hòa quốc
tế đến mức cuối cùng tồn tại một thử nghiệm được công nhận ở Châu Âu cũng như
Hoa Kỳ và Nhật Bản. Ngoài phần giải thích đơn giản về bài thi, cần nêu rõ
những thay đổi quan trọng nhất so với bài thi trước.
Vì không phải tất cả các điểm có thể được hài hòa, những điểm sẽ được xử lý
trong tương lai ở Hoa Kỳ và Nhật Bản so với ở Châu Âu cũng sẽ được đề cập.
Điều kiện môi trường trong kiểm vô trùng
Thử nghiệm độ vô trùng phải được thực hiện trong điều kiện vô trùng để ngăn ngừa nhiễm bẩn thứ cấp. Để đạt được điều này, môi trường thử nghiệm phải được điều chỉnh phù hợp với quy trình thử nghiệm.
Tuy nhiên, các biện pháp được thực hiện không được ảnh hưởng đến bất kỳ chất
gây ô nhiễm nào hiện có. Ví dụ, trong Hướng dẫn sử dụng phép thử độ vô trùng,
không hài hòa, không ràng buộc, dược điển Châu Âu có đề cập đến việc sử dụng
băng chuyền tầng phải có trong phòng sạch loại B (theo yêu cầu của EU-
GMP-Hướng dẫn sản xuất các sản phẩm vô trùng) hoặc sử dụng chất cách ly.
Có một số điểm có lợi cho bộ cách ly:
- Mức độ tin cậy của kết quả cao do bảo vệ sản phẩm tối đa (giảm tỷ lệ ô nhiễm thứ cấp)
- Các nhà điều tra của FDA khuyến nghị sử dụng chất cách ly để kiểm tra độ vô trùng.
- Kỹ thuật đã được thử nghiệm và thử nghiệm ở Bắc Mỹ (trong <71> Kiểm tra độ vô trùng, USP đề cập rõ ràng đến việc sử dụng các chất cách ly để kiểm tra độ vô trùng).
- Mức độ linh hoạt cao cho việc triển khai nhân sự vì không yêu cầu quy trình khóa không khí.
- Yêu cầu về không gian thấp (dụng cụ cách ly thử nghiệm vô trùng thông thường có kích thước xấp xỉ 1 x 2 x 2 m)
- Không yêu cầu hệ thống HVAC đắt tiền cho các phòng thử nghiệm vô trùng và bảo trì chúng (các nhà lập pháp không yêu cầu bất kỳ điều kiện môi trường đặc biệt nào đối với chất cách ly. Ở Ph. Eur. Không có yêu cầu cơ bản nào đối với chất cách ly, Kiểm tra độ vô trùng USP - Xác nhận hệ thống cách ly: Chất cách ly để kiểm tra độ vô trùng không cần lắp đặt trong phòng sạch đã được phân loại)
- Không có chi phí cho quần áo vô trùng (mua, chăm sóc, giặt là và khử trùng)
- Giám sát thường xuyên tối thiểu trong thiết bị cách ly, không giám sát môi trường hoặc nhân viên.
Giám sát môi trường trong vô trùng
Các điều kiện làm việc quy định để thực hiện các thử nghiệm phải được giám sát thường xuyên bằng việc kiểm tra môi trường thích hợp trong khu vực làm việc và sử dụng các biện pháp kiểm tra vô trùng.Giám sát tình trạng vệ sinh trong các phòng thử nghiệm vô trùng
Trong bảng 4 và bảng 5, có một gợi ý về việc thực hiện yêu cầu kiểm tra môi trường trong phòng thử nghiệm vô trùng dựa trên các giới hạn và tần suất để giám sát sản xuất. Các phương pháp thông thường đối với quy trình vô trùng được sử dụng để giám sát phòng sạch (chương 12.G Giám sát vi sinh). Không có yêu cầu sâu rộng như trong quy trình vô trùng.Giới hạn giám sát môi trường trong phòng thử nghiệm vô trùng | ||
---|---|---|
Đo đạc | Giới hạn cảnh báo | Giới hạn hành động |
Hạt không khí | ||
Theo LF | ³ 0,5 mm | tối đa 3.500 / m 3 |
³ 5 mm | tối đa 0 / m 3 | |
Số lượng vi sinh vật không khí | ||
Theo LF | - | 0 (1) CFU / m 3 |
LF bên ngoài | 3 CFU / m 3 | 7 CFU / m 3 |
Bề mặt | ||
Bàn / tường dưới LF | 2 CFU / 25 cm 2 | 3 CFU / 25 cm 2 |
Bề mặt / tường bên ngoài LF | 2 CFU / 25 cm 2 | 5 CFU / 25 cm 2 |
Sàn nhà | 5 CFU / 25 cm 2 | 10 CFU / 25 cm 2 |
Nhân viên | ||
Cánh tay | - | 0 (1) CFU / 25 cm 2 |
Tay | - | 0 (1) CFU / 25 cm 2 |
Hood bên ngoài | - | 0 (1) CFU / 25 cm 2 |
Đề xuất giám sát môi trường trong phòng thử nghiệm vô trùng - tần số | |||
---|---|---|---|
Kỹ thuật | Tính thường xuyên | Địa điểm | Thực hiện |
Hạt không khí | |||
Kiểm tra rò rỉ | Sáu tháng | Mỗi băng ghế LF | Hội thảo về khí hậu |
Đếm hạt | Tiếp diễn | Mỗi băng ghế LF | |
Số lượng vi sinh vật không khí | |||
Không khí dưới LF | |||
|
Sau bài kiểm tra | Dưới LF trên bàn | Nhân viên phòng thí nghiệm |
|
Trong quá trình kiểm tra | Dưới LF trên bàn | Nhân viên phòng thí nghiệm |
Không khí bên ngoài LF | Trước khi thử nghiệm bắt đầu | Theo kế hoạch | Nhân viên phòng thí nghiệm |
Bề mặt | |||
Theo LF | Trước và sau khi kiểm tra | Dưới LF trên bàn | Nhân viên phòng thí nghiệm |
LF bên ngoài | Sau bài kiểm tra | Dưới LF trên bàn | Nhân viên phòng thí nghiệm |
Nhân viên | Sau khi bắt đầu kiểm tra |
|
Nhân viên phòng thí nghiệm |
Sáu tháng một lần, bộ đĩa hoặc dải thạch thứ hai cũng được áp dụng để kiểm tra vi khuẩn kỵ khí. |
Giám sát tình trạng vệ sinh trong máy cách ly
Ưu điểm chính của việc sử dụng dụng cụ phân lập xét nghiệm vô trùng là các xét nghiệm được thực hiện trong môi trường tiệt trùng không có người.
Điều này làm giảm nguy cơ ô nhiễm xuống 0. Tuy nhiên, thật sai lầm khi
nghĩ rằng bạn có thể vượt qua mà không cần theo dõi.
Điều này được nêu rõ trong Phụ lục 1 của Hướng dẫn EU-GMP: ("Việc giám sát
phải được thực hiện thường xuyên và nên bao gồm việc kiểm tra rò rỉ của bộ
cách ly và hệ thống găng tay / ống bọc"). Câu hỏi đặt ra giới hạn nào sau đó
nảy sinh.
Có vẻ hợp lý khi áp dụng các giới hạn không khí bình thường cho phòng loại A,
nhưng nó đã được chấp nhận yêu cầu không khí 0 CFU / m 3 trong dụng cụ cách ly thử nghiệm vô trùng. Điều này cũng phù hợp
với các đề xuất trong Hướng dẫn vô trùng của FDA, nơi không có vi sinh vật nào
được dung nạp trong không khí đối với các quá trình vô trùng (Các mẫu từ môi
trường Loại 100 ... thường không có chất gây ô nhiễm vi sinh). 0 CFU / 25
cm 3 phải đạt được đối với các bề
mặt vì đây tất nhiên là độ tiệt trùng thực sự, đã được xác nhận (xem
Bảng 6).
Giới hạn giám sát môi trường trong khu cách ly | ||
---|---|---|
Đo đạc | Giới hạn cảnh báo | Giới hạn hành động |
Hạt không khí | ³0,5 mm ³5 mm | tối đa Tối đa 3.500 / m 3 . 0 / m 3 |
Số lượng vi sinh vật không khí | 0 CFU / m 3 | |
Bề mặt | 0 CFU / 25 cm 2 |
Bảng 7 Đề xuất giám sát môi trường trong bộ cách ly - tần số
Phương pháp giám sát đặc biệt có vấn đề. Người ta phải dự đoán
H 2 O 2 còn sót lại trong phòng, được thải ra từ bề mặt thạch ẩm và ngăn cản
bất kỳ vi sinh vật nào có mặt phát triển. Việc chứng minh sự thúc đẩy
tăng trưởng bằng cách sử dụng các sinh vật đối chứng ( đối chứng tích cực ) có ý nghĩa đặc biệt ở đây. Đối với điều này, tối đa 100 CFU
tụ cầu ATCC 6538 được nhỏ giọt lên các đĩa hoặc dải không có sự phát triển sau
khi ủ.
Đề xuất về giám sát môi trường trong khu cách ly - tần số | |
---|---|
Đối tượng thử nghiệm | Tính thường xuyên |
Không khí | |
Người lấy mẫu | Bắt đầu và kết thúc bài kiểm tra |
Mở chai | Thời lượng kiểm tra |
Bề mặt | |
Tấm tiếp xúc RODAC (Replicate Organism Detection and Counting) | Kết thúc bài kiểm tra |
Mỗi chiếc găng tay | |
Ngón tay | Kết thúc bài kiểm tra |
Găng tay | Kết thúc bài kiểm tra |
Cổ tay áo | Kết thúc bài kiểm tra |
Điều này chứng tỏ rằng không có sinh vật nào có thể phát triển được. Đối với
thử nghiệm không khí, có thể thử đi đến một giải pháp thỏa đáng bằng cách sử
dụng nhiều lần chiết (ví dụ: 2 x 500 l với RCS).
Đối với thiết bị RCS, hiện nay trên thị trường có bán các dải thạch với chất
phụ gia trung hòa phù hợp giúp giảm bớt các vấn đề về việc chứng minh số lượng
vi sinh vật trong không khí. Đối với thử nghiệm tiếp xúc bề mặt,
Becton-Dickinson đã đưa ra thị trường một đĩa tiếp xúc phù hợp có chứa thạch
trung hòa D / E. Các đĩa có phụ gia trung hòa thích hợp cũng nên được sử
dụng cho bộ thu với đĩa petri môi trường nuôi cấy rắn.
Phương pháp làm việc vô trùng
Việc kiểm tra phương pháp làm việc vô trùng theo yêu cầu của dược điển ( đối chứng âm tính ) phải được giám sát thường xuyên bằng cách sử dụng các chế phẩm vô trùng đã được chứng minh.
Các biện pháp kiểm soát này phải được thực hiện cùng lúc với thử nghiệm, vì
kết quả phải được sử dụng khi đưa ra quyết định về bất kỳ thử nghiệm tiếp theo
nào (xem chương 12.H.6 Đọc và đánh giá).
Nếu các phương pháp khác nhau được thực hiện (lọc màng / cấy trực tiếp môi
trường nuôi cấy) và các sản phẩm thuốc được thử nghiệm yêu cầu các loại chế
phẩm khác nhau (ví dụ: ống nước, lọ có chất đông khô, v.v.), thì thử nghiệm
phải được thực hiện đối với các phương pháp và chuẩn bị các loại. Nếu
nhiều người cùng thực hiện thử nghiệm, thì mỗi người cũng cần phải có các đối
chứng âm tính.
Mô tả phương pháp
Dược điển có các mô tả phương pháp cho phương pháp lọc qua màng và phương pháp cấy trực tiếp. Lọc màng được quy định là phương pháp được lựa chọn (Kỹ thuật lọc màng được sử dụng bất cứ khi nào tính chất của sản phẩm cho phép ...) Phương pháp lọc màng được mô tả cho các phương pháp liều lượng sau:- Dung dịch nước
- Bột hòa tan
- Dầu và dung dịch dầu
- Thuốc mỡ và kem
- Chất lỏng có dầu
- Thuốc mỡ và kem
- Catgut và các vật liệu khâu phẫu thuật khác dùng trong thú y
Chỉ có hai thay đổi. Hướng dẫn "Tổng thể tích được lọc qua màng không
được vượt quá 1000 ml, trừ những trường hợp chính đáng và được phép" (đối với
lọc qua màng) và "Nếu thể tích làm đầy của vật chứa mẫu lớn hơn 100 ml, thì
phương pháp lọc màng phải là được sử dụng, trừ những trường hợp chính đáng và
được phép "(đối với phương pháp cấy trực tiếp) khó biện minh một cách khách
quan và đã bị loại bỏ và không được thay thế.
Ủ mẫu trong kiểm vô trùng
Văn bản hài hòa quy định thời gian ủ tối thiểu là 14 ngày. Môi trường thioglycolate (chất môi trường) lỏng (để xác định nhiễm vi khuẩn) 30-35 ° C và môi trường phân hủy casein đậu nành (để chứng minh nhiễm nấm) 20-25 ° C. Điều này có nghĩa là tùy chọn trước đó trong USP cho "ủ trong bảy ngày đối với các sản phẩm được khử trùng trong thùng chứa cuối cùng" không còn có thể được sử dụng.Số lượng mẫu trong kiểm vô trùng
Số lượng mẫu đã được thống nhất như một phần của sự hài hòa, nhưng chỉ USP và JP muốn đưa những con số này vào phần ràng buộc. Ở Ph. Eur, chúng nằm trong "Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm độ vô trùng" không ràng buộc như trước đây (Bảng 8).
Nó chắc chắn là một ý tưởng tốt để tuân theo những đề xuất này. Nếu không
thì bảng không thay đổi; chỉ có các quy định về thử nghiệm vật liệu rời
đã được thêm vào. Khi xác định số lượng mẫu, số lượng thử nghiệm tối thiểu
cũng phải được xem xét (xem Bảng 8), vì số lượng mẫu phải tăng gấp đôi
nếu toàn bộ nội dung của vật chứa được thử nghiệm.
Kiểm tra độ vô trùng số lượng tối thiểu | |
---|---|
Số lượng mặt hàng trong lô | Số lượng tối thiểu các hạng mục cần kiểm tra cho mỗi phương tiện, trừ khi được chứng minh và cho phép khác * |
Các chế phẩm tiêm | |
£ 100 container > 100 nhưng ³ 500 > 500 | 10% hoặc 4 thùng chứa, tùy theo cái nào lớn hơn 10 thùng chứa 2% hoặc 20 thùng chứa ** tùy theo cái nào nhỏ hơn |
Các chế phẩm dùng cho mắt và các chế phẩm không tiêm khác | |
£ 200 container > 200 container | 5% hoặc 2 thùng chứa tùy theo 10 thùng chứa nào lớn hơn |
Nếu sản phẩm được trình bày dưới dạng hộp đựng liều đơn, hãy áp dụng sơ đồ nêu trên cho các chế phẩm dùng ngoài đường tiêm. | |
Catgut và các vật liệu khâu phẫu thuật khác dùng trong thú y | |
2% hoặc 5 gói tùy theo giá trị nào lớn hơn, lên đến tổng số tối đa là 20 gói | |
Sản phẩm rắn số lượng lớn | |
<4 container > 4 container nhưng £ 50 container > 50 container | Mỗi thùng chứa 20% t hoặc 4 thùng chứa, tùy theo giá trị nào lớn hơn 2% của 10 thùng chứa tùy theo giá trị nào lớn hơn |
Các gói thuốc kháng sinh số lượng lớn (lớn hơn 5 g) | |
6 thùng chứa | |
* Nếu nội dung của một vật chứa đủ để cấy hai phương tiện, cột này cung cấp số lượng hộp chứa đơn lẻ cần thiết cho cả hai phương tiện cùng nhau. ** JP và USP sẽ chỉ ra 10 vùng chứa cho các chữ cái có khối lượng lớn |
Số lượng mẫu vô trùng
Lượng thử nghiệm yêu cầu được nêu trong bảng trong phần chính của dược điển (và do đó có giá trị ràng buộc). Là một phần của sự hài hòa, một số đại lượng cần thử nghiệm đã được thay đổi (có thể có nghĩa là đánh giá lại các phương pháp đã sử dụng).
Tổng quan về các yêu cầu được đưa ra trong bảng 9 và bảng 10,
cũng hiển thị số lượng được yêu cầu trước đó, để dễ dàng xem liệu có cần xác
nhận đối với các sản phẩm thuốc đã được giới thiệu hay không.
Số lượng mẫu để kiểm tra độ vô trùng - đường tiêm | ||||
---|---|---|---|---|
Số lượng mỗi container | Số lượng tối thiểu được sử dụng cho mỗi phương tiện trừ khi được chứng minh và cho phép khác | |||
Ph. Eur. 4 | Ph. Eur. 5 | |||
Chất lỏng | ||||
<1 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | ||
1-40 ml | Một nửa nội dung của mỗi thùng chứa | Một nửa lượng chứa trong mỗi hộp nhưng không ít hơn 1 ml | ||
> 40 ml £ 100 ml | 20 ml | 20 ml | ||
> 100 ml | 20 ml | 10 phần trăm lượng nội dung của vật chứa nhưng không ít hơn 20 ml | ||
Chất lỏng kháng sinh | ||||
<1 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | ||
³1 ml | Một nửa lượng chứa trong mỗi hộp nhưng không quá 20 ml | 1 ml | ||
Chất rắn | ||||
<50 mg | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | ||
³50 mg nhưng <300 mg | Một nửa nội dung của mỗi thùng chứa | Một nửa hàm lượng của mỗi thùng chứa nhưng không ít hơn 50 mg | ||
300 mg - 5 mg | 150 mg | 150 mg | ||
> 5 g | 150 mg | 500 mg |
Số lượng mẫu để kiểm tra độ vô trùng - không dùng để tiêm | ||
---|---|---|
Số lượng mỗi container | Số lượng tối thiểu được sử dụng cho mỗi phương tiện trừ khi được chứng minh và cho phép khác | |
Ph. Eur. 4 | Ph. Eur. Suppl. 4,6 | |
Các chế phẩm dùng cho mắt và các chế phẩm không tiêm khác | ||
Dung dịch nước | ||
<1 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 2,5 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa |
1-40 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 2,5 ml | Một nửa lượng chứa trong mỗi hộp nhưng không ít hơn 1 ml |
> 40 ml và £ 100 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 2,5 ml | 20 ml |
> 100 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 2,5 ml | 10% lượng chứa nhưng không ít hơn 20 ml |
Chất lỏng kháng sinh | ||
<1 ml | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa |
³1 ml | Một nửa lượng chứa trong mỗi hộp nhưng không quá 20 ml | 1 ml |
Các chế phẩm khác hòa tan trong nước hoặc isopropyl myristate | ||
Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 0,25 g | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 200 mg | |
Các chế phẩm không hòa tan, kem và thuốc mỡ bị đình chỉ hoặc nhũ tương | ||
Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 0,25 g | Toàn bộ nội dung của mỗi thùng chứa để cung cấp không ít hơn 200 mg | |
Catgut và các chỉ khâu phẫu thuật khác dùng trong thú y | ||
3 đoạn của một sợi (mỗi đoạn dài 30 cm) | 3 đoạn của một sợi (mỗi đoạn dài 30 cm) |
Đọc và đánh giá mẫu vô trùng
Nhiều lần trong và sau thời gian ủ, các mẫu cấy được kiểm tra vĩ mô để tìm vi sinh vật phát triển có thể nhìn thấy được. Nếu có sự tăng trưởng, thử nghiệm có thể bị gián đoạn và sau đó đánh giá. Nếu không xác định được sự phát triển thì sản phẩm được thử nghiệm phù hợp với thử nghiệm độ vô trùng. Tuy nhiên, nếu có thể phát hiện được sự tăng trưởng thì sản phẩm không thỏa mãn các yêu cầu, trừ khi phép thử có thể được chứng minh là không hợp lệ vì những lý do không liên quan đến bản thân sản phẩm.
Thử nghiệm chỉ có thể được coi là không hợp lệ và được lặp lại nếu một hoặc
nhiều điều kiện tóm tắt trong bảng 11 được đáp ứng.
Điểm bốn trong bảng11 ("sau khi xác định danh tính của các vi sinh vật
được phân lập từ thử nghiệm, sự phát triển của loài này hoặc các loài này có
thể được coi là lỗi liên quan đến vật liệu và / hoặc kỹ thuật được sử dụng
trong tiến hành kiểm tra độ vô trùng ") chỉ là cơ sở đủ để lặp lại nếu loài
sinh vật có thể được chỉ định rõ ràng.
Một loài tương tự với các phương pháp nhận dạng thông thường là không đủ trong trường hợp này. Điều này được nêu rõ ràng trong "Hướng
dẫn sử dụng xét nghiệm độ vô trùng" không hài hòa, không ràng buộc.
Nếu việc xác định vi sinh vật được sử dụng làm tiêu chí duy nhất để tuyên bố
thử nghiệm độ vô trùng không hợp lệ, thì các kỹ thuật nhạy cảm hơn phải được
áp dụng như các phương pháp vi sinh / sinh hóa, ví dụ như đánh máy phân tử với
các tương đồng RNA / DNA. Có thể hình dung được các lý do khác khiến thử
nghiệm độ vô trùng bị vô hiệu, ví dụ, nếu thử nghiệm được thực hiện trong bộ
cách ly và có vấn đề với tính toàn vẹn của hệ thống. Hướng dẫn này đã
được chứa cho đến bây giờ trong USP.
Tuyên bố không hợp lệ của thử nghiệm vô trùng |
---|
Kiểm tra chỉ có thể được xem là không hợp lệ nếu một hoặc nhiều điều kiện được đáp ứng |
|
|
|
|
Quy trình trong trường hợp môi trường nuôi cấy có độ đục
Nếu vật liệu được kiểm tra làm vẩn đục môi trường nuôi cấy do đó khó xác định được sự tồn tại hoặc sự phát triển của vi sinh vật vào cuối thời gian ủ, thì lượng môi trường nuôi cấy thích hợp phải được chuyển vào các vật chứa mới có cùng môi trường nuôi cấy.
Hạn chế chính khi thực hiện thử nghiệm, như USP và Ph. Eur. Đã nêu, là cách
tiến hành trong trường hợp môi trường nuôi cấy có độ đục. Ph.
Eur. Yêu cầu: Việc ủ vật chứa ban đầu và vật chứa với môi trường nuôi cấy
đã chuyển phải được tiếp tục trong tổng thời gian ít nhất là 14 + 7 ngày, tính
từ lần cấy ban đầu.
USP yêu cầu các mẫu cấy phụ phải được tạo ra từ ngày thứ ba đến ngày thứ bảy
và các mẫu cấy phụ phải được ủ từ 11 đến 7 ngày, để chúng có tổng thời gian ủ
là 14 ngày. Mặc dù thời gian ủ này ngắn hơn đáng kể so với Ph.
Eur.,
Nhưng quy trình này hơi có vấn đề. Thứ nhất, khi USP xác định thời gian ủ
cho thử nghiệm ban đầu, người ta cho rằng các sinh vật cần 14 ngày để nhân lên
thành số lượng có thể nhìn thấy trong môi trường lỏng bằng phương pháp cấy
trực tiếp.
Nếu có hiện tượng đục (thường xảy ra với phương pháp cấy trực tiếp), lúc này
người ta cho rằng sau ngày thứ ba đã có đủ số lượng sinh vật để phát hiện đủ
vật liệu sinh vật khi chuyển vào vật chứa môi trường nuôi cấy mới.
Đây là một quan niệm sai lầm đáng tiếc. Thời gian ủ dài 14 ngày này không
cần thiết vì sinh vật phát triển quá chậm mà vì sinh vật thường có giai đoạn
trễ rất dài mà chúng không phát triển. Ví dụ, một sinh vật có vấn đề đối
với việc lấp đầy vô trùng là vi khuẩn Propionibacterium acnes (khuẩn ram
dương), theo kinh nghiệm của chúng tôi thường không phát triển thành nồng độ
sinh vật có thể nhìn thấy được trong môi trường nuôi cấy cho đến sau ngày thứ
mười hai.
Những sinh vật này chắc chắn không được phát hiện với quy trình do USP đề
xuất. Sự khác biệt lớn này hiện đã được sửa chữa. Văn bản hài hòa hiện
nói rằng 14 ngày sau khi bắt đầu ủ, các phần (mỗi phần không dưới 1 ml - JP
yêu cầu chuyển các phần phù hợp và bỏ qua ở đây) của môi trường nuôi cấy phải
được chuyển sang các vật chứa mới với cùng môi trường nuôi cấy. Sau đó
phải tiếp tục ủ vật chứa ban đầu và vật chứa mới cấy trong ít nhất bốn ngày
nữa để có tổng thời gian ủ là 18 ngày.
Môi trường nuôi cấy
Hai dược điển đặt tên như sau là môi trường nuôi cấy:- Môi trường thioglycolat dạng lỏng Đây chủ yếu được sử dụng để phát hiện vi khuẩn kỵ khí, nhưng cũng có thể được sử dụng để phát hiện vi khuẩn hiếu khí.
- Môi trường phân hủy casein đậu nành Đây là môi trường chủ yếu thích hợp để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và nấm.
Có thông tin rất chi tiết về việc lưu trữ môi trường nuôi cấy:
- Môi trường thioglycolat dạng lỏng Chất này phải được bảo quản trong các vật chứa vô trùng, kín khí ở nhiệt độ từ 2 đến 25 ° C. Nếu hơn một phần ba trên của môi trường chuyển sang màu hồng, nó có thể được sử dụng lại bằng cách đun nóng cho đến khi màu hồng biến mất sau đó nhanh chóng làm lạnh. Phương tiện chỉ có thể được lưu trữ trong dài hạn với sự xác nhận có liên quan (JP và USP sẽ không áp dụng điều khoản này). Câu hỏi "dài hạn" nghĩa là gì vẫn chưa được trả lời - nhưng chắc chắn là dài hơn 1 tháng. Nếu môi trường được bảo quản trong các vật chứa không đậy kín, nó có thể được sử dụng trong một tháng với điều kiện tiên quyết là các đặc tính thúc đẩy tăng trưởng đã được thử nghiệm trong vòng hai tuần kể từ khi môi trường được sử dụng và chất chỉ thị màu không bao phủ quá 1/3 phía trên.
- Môi trường phân hủy casein đậu nành Chất này phải được bảo quản trong các vật chứa vô trùng, đậy kín ở nhiệt độ từ 2 đến 25 ° C, trừ khi môi trường này phải được sử dụng ngay lập tức. Phương tiện chỉ có thể được lưu trữ lâu dài sau khi xác nhận có liên quan.
Kiểm soát môi trường nuôi cấy
Mỗi lô môi trường nuôi cấy được sử dụng phải tuân theo các phép thử được liệt kê dưới đây, có thể được thực hiện trước hoặc cùng lúc với phép thử sản phẩm đang được khảo sát:- Độ vô trùng : Các mẫu môi trường nuôi cấy được ủ trong 14 ngày tùy theo mục đích sử dụng, tức là môi trường thioglycate thường được ủ ở 30-35 ° C và môi trường phân hủy casein đậu nành ở 20-25 ° C. Không có sự phát triển của vi sinh vật phải được phát hiện.
- Môi trường thioglycolat dạng lỏng: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus Điều tra viên của FDA cũng mong đợi các chủng hoang dã được sử dụng (các sinh vật đã được tìm thấy như một phần của quá trình giám sát tại các đơn vị).
- Môi trường tiêu hóa casein đậu nành: Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans Thời gian ủ lên đến ba ngày đối với vi khuẩn và năm ngày đối với nấm. Các chủng tham chiếu được đưa ra trong Bảng 12. Số lượng đoạn văn từ văn hóa gốc được giới hạn ở 5, như trước đây.
Sinh vật tham chiếu cho phép thử độ vô trùng để xác nhận phương pháp và kiểm soát môi trường nuôi cấy | ||
---|---|---|
Sinh vật | Chủng | Mới được ghi lại |
Vi khuẩn hiếu khí | ||
Staphylococcus aureus | ATCC 6538, CIP 4,83, NCTC 10788, NCIMB 9518 | - |
Bacillus subtilis | ATCC 6633, CIP 52,62, NCIMB 8054 | - |
Pseudomonas aeruginosa | ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 | - |
Vi khuẩn k an khí | ||
Clostridium sporogenes | ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 | ATCC 11437 |
Nấm | ||
Candida albicans | ATCC 10231, IP 48,72 | NCPF 3179, ATCC 2091, IP1180.79 |
Aspergillus niger | ATCC 16404 | IP 1431.83, IMI 149007 |
Xác nhận phương pháp
Tất cả các phương pháp phải được xác nhận đối với chất cụ thể và / hoặc sản phẩm thuốc bằng cách sử dụng tất cả các vi sinh vật có tên trong bảng 13. Các chủng nêu trong bảng 12 phải được sử dụng. Nếu việc sử dụng đã được thực hiện theo phương án trước đó là sử dụng một loại vi khuẩn hiếu khí, một loại vi khuẩn kỵ khí và một loại nấm, thì điều này có nghĩa là phải xác nhận lại trong mọi trường hợp. Các nhà điều tra của FDA đôi khi mong đợi xác nhận với các sinh vật đã được tìm thấy trong đơn vịVừa phải | Vi sinh vật |
---|---|
Môi trường thioglycolat dạng lỏng | Clostridium sporogenes Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus |
Môi trường tiêu hóa casein đậu nành | Trực khuẩn Aspergillus niger Candida albicans. |
Sau khi ủ, phải phát hiện được sự phát triển so với các vật chứa đối chứng đi
kèm. Sau đó, phương pháp này có thể được xem là hợp lệ. Nếu quan sát
thấy sự ức chế của vi sinh vật, điều này phải được loại bỏ, ví dụ như bằng
cách trung hòa, pha loãng, tăng thể tích rửa, v.v ... Đặc biệt đối với các chế
phẩm có hàm lượng chất kháng khuẩn cao, có thể hữu ích để kiểm tra lại sự thúc
đẩy tăng trưởng sau khi ủ. . Câu hỏi về thời điểm xác nhận phải được thực hiện
được quy định rõ ràng:
- Nếu việc kiểm tra độ vô trùng được thực hiện với một sản phẩm mới
- Nếu có sự thay đổi trong các điều kiện thực nghiệm của thử nghiệm, điều này không thể hiện rõ khi nào người ta phải giả định những thay đổi trong việc thực hiện thử nghiệm (theo tôi điều này không nên hiểu theo nghĩa quá hẹp).
Tuy nhiên, trong chương Xác thực việc thu hồi vi sinh vật từ các điều khoản
dược lý của USP, nó quy định rằng ba lần xác nhận độc lập nên được thực
hiện. FDA giải thích rằng việc xác nhận phải được thực hiện với ba lô
khác nhau để loại trừ bất kỳ ảnh hưởng nào của công thức sản phẩm thuốc, v.v.
("Ba thử nghiệm cũng nên được thực hiện trên ba lô khác nhau để chứng minh
rằng thử nghiệm không bị ảnh hưởng bởi trong các biến thể đặc điểm kỹ thuật
của các lô khác nhau của công thức ").
Mặc dù điều này chỉ liên quan đến việc xác nhận các phép xác định số lượng vi
sinh vật, Luôn có các cuộc thảo luận về việc liệu các xác nhận có thể chuyển
sang nồng độ hoạt chất khác hay không. Dược điển Châu Âu quy định rằng
việc xác nhận phải được thực hiện nếu việc kiểm tra độ vô trùng được thực hiện
đối với một sản phẩm mới hoặc nếu có sự thay đổi trong các điều kiện thử
nghiệm.
Điều này có nghĩa là việc xác nhận phải được thực hiện đối với mọi sản phẩm
thuốc mới và trong trường hợp có những thay đổi trong quá trình thực hiện thử
nghiệm của thử nghiệm. Ngoại lệ duy nhất có thể hình dung được là nếu một
sản phẩm thuốc có thành phần giống hệt nhau có nhiều liều lượng hoạt chất khác
nhau.
Trong trường hợp này, việc xác nhận nồng độ cao nhất và thấp nhất có thể
chuyển sang các liều lượng ở giữa với điều kiện là hai phương pháp đã được xác
nhận là giống hệt nhau.
Bản tóm tắt Dược điển yêu cầu vô trùng đối với nhiều loại sản phẩm thuốc. Tuy nhiên, điều này không có nghĩa là phải thử độ vô trùng. Cũng có thể giải phóng tham số đối với các chế phẩm được khử trùng trong vật chứa cuối cùng. Nếu quyết định tiến hành thử nghiệm độ vô trùng thì phải tuân theo các hướng dẫn trong dược điển. Các cuộc điều tra phải được thực hiện cùng lúc với quá trình kiểm tra cũng như việc thực hiện thuần tuý của cuộc kiểm tra. Điều quan trọng là phải thực hiện xác nhận cụ thể đối với dược chất / sản phẩm trước khi tiến hành thử nghiệm vô trùng. |